褐腐病是在经济水平上影响核果的最严重的真菌,主要由Monilinia laxa e M. fructicola.引起。用于鉴定M. fructicola的常规方法主要基于表型特征,而病原体定量并不总是准确的。 相比之下,基于分子工具的方法可改善病原体的表征和鉴定,但并不会区分活的和死的分生孢子。
西班牙列伊达的IRTA研究中心的研究人员优化了PMA-qPCR方法,并将其应用于量化人为和天然感染样品中M. fructicola的活细胞。qPCR方法有良好的效率和灵敏度,其定量限度低于使用平板计数方法获得的结果。
为了开发这种方法,研究人员使用丙二胺(PMA)作为预处理,进行20分钟的孵育,然后暴露于发光二极管(LED)中30分钟。结合qPCR,这种处理能够精确测量活细胞,而不会高估死细胞数量。
“通过在自然感染的样品中使用这种方法,可以精确定量活孢子菌细胞,与其他传统方法不同,这种方法将是以后研究中定量M. fructicola活细胞的新工具。”
来源:Vilanova L., Usall J., Teixidó N., Torres R., 'Assessment of viable conidia of Monilinia fructicola in flower and stone fruit combining propidium monoazide (PMA) and qPCR', 2017, Plant Pathology. doi:10.1111/ppa.12676
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